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Bioss讲堂|HE染色疑难解答
发表者:北京亚美游生物      发表时间:2018-12-10

本期导读:HE染色法是组织学、胚胎学、病理学教学与科研中最基本、使用最广泛的技术方法。一张质量上乘的HE切片是病理医生得以做出正确诊断的关键。影响HE染色质量的因素是多方面的。本文主要对HE染色中常见的几个问题及其对策进行分析讨论。


苏木精——伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) ,简称HE染色法 ,石蜡切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ,主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ;伊红为酸性染料 ,主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色 。


HE染色过程:

将已入蒸馏水后的切片放入苏木精水溶液中染色数分钟。

酸水及氨水中分色,各数秒钟。

流水冲洗1小时后入蒸馏水片刻。

入70%和90%酒精中脱水各10分钟。

入酒精伊红染色液染色2—3分钟。

染色后的切片经纯酒精脱水,再经二甲苯使切片透明。

将已透明的切片滴上加拿大树胶,盖上盖玻片封固。


HE染色常见的问题及解决方法

问题1  切片呈雾状/发灰/发白,核染色模糊

原因:①待封还潮;②苏木素过氧化老化,冰醋酸挥发;③脱水,透明剂不良,杂质过多;

解决方法:空气除湿;②苏木素过滤后加入冰醋酸(促染剂);③常规更换酒精,二甲苯。


问题2  染色不均

原因:固定不充分;②高浓度酒精脱水时间过长;③浸蜡不佳;④染色时间掌握不好;

解决方法:①定期更换染色液;②用2%铁明矾处理;③浸蜡温度高于熔点2℃左右;④苏木素染色镜下控制。

问题3  细胞成分蓝色,如粘液,胶原蛋白或平滑肌

原因:①苏木素溶液过染;②分化不充分;③苏木素溶液的PH值>3;

解决方法:①缩短染色时间;②用1%盐酸酒精分化2-5s,洗脱过染胞核,不应着色的组织成分;③用乙酸调节苏木素PH值为2.5;④提高酸性酒精的浓度。

问题4  细胞核染色太浅
原因:①苏木素溶液过老化;②分化时间过长;③苏木素溶液染色时间短;④固定处理不良,组织不易染色;解决方法:①过滤后100ml苏木素+1ml冰醋酸,或更换新鲜苏木素溶液;②减少分化时间或稀释分化液;③延长苏木素染色时间;④高浓度酒精固定时间过长,染不上色,用2%铁明矾处理。

问题5  胞质染色太深

原因:①切片在伊红溶液中时间过长;②伊红染色后分化不足;③伊红染液可能过浓;

解决方法:①减少伊红溶液染色时间,稀释伊红染液;②85%酒精增加分化时间。

问题6  胞质染色太淡

原因:①伊红染液使用时间太久;②伊红染液的PH值>4.5,乙醇脱水易褪色;③伊红染液后酒精冲洗不正确;④伊红染色时间太短;

解决方法:①更换新鲜的伊红染液;②用浓醋酸调节伊红染液PH值(4~4.5),伊红PH值<3.6,核发紫,对比不强;伊红染液PH值>5,染不上;③减少伊红步骤后酒精冲洗的时间;④增加伊红溶液的染色时间。

问题7  细胞核发红棕色

原因:①苏木素染色液氧化过度;②返蓝不足;

解决方法:①及时更换然染液;②返蓝可用流水、温水或稀氨水、0.2%碳酸氢钠等。


举栗


Ⅰ 正常染色(细胞核呈蓝色,细胞浆呈玫红色,颜色分明)(肾)


Ⅱ 细胞成分蓝色(胎盘)


Ⅲ 切片呈雾状/发灰/发白,核染色模糊(胎盘)


Ⅳ 胞质染色太深(肝)


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